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細胞STR分型檢測

  行業動態     |      2022-05-09 20:28:17
 
  細胞STR分型介紹
 
  短串聯重復序列(shorttandemrepeat,STR)是核心序列為2-6個堿基的短串聯重復結構。20世紀90年代初,STR基因座首次作為一種重要的遺傳標記在人類親權鑒定中被使用(Edwardsetal.,1992;Edwardsetal.1991)。
 
  細胞STR分型(celllineSTRgenotyping),是選用D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、PentaE、TH01、D12S391、D2S1338和FGA等19個具有高度多態性基因座和一個性別基因位點Amelogenin對人源細胞進行STR分型檢測。根據STR分型結果對細胞的生長狀態(是否存在交叉污染)和細胞的株系進行確認的技術手段。
 
  細胞STR分型的意義
 
  科研成果能夠得到重復確認,對于證實科學發現是十分重要的。如果數據無法重復,那么這個結果能否得到業界的認可并為人所追隨就是個很大的疑問了。很多生物醫藥的研究都采用培養細胞來進行,這些細胞可能是從各大細胞庫得來,也可能是受贈于其它研究人員。據估計,15-20%的時間里,實驗中所使用的細胞已經不是原來的細胞系,或者與其它細胞系發生了交叉污染(1-3)。ATCC以及其它細胞庫(CoriellInstituteforMedicalResearch,EuropeanCollectionofCellCultures(ECACC),DeutscheSammlungvonMikrorganismenandZellkulturen(DSMZ),JapaneseCollectionofResearchResources)都收到過提交的“錯誤”的細胞系,盡管提交者把細胞系提交到上述機構之前,還經過了檢驗。然而,最終證實這些細胞系還是鑒別錯了(4,5)。此外,干細胞也可能被污染,作為干細胞賴以增殖的哺育細胞層,小鼠細胞很容易污染到干細胞中。顯然,細胞系遭到污染、特征鑒別錯誤,將會極大地威脅著基于這些細胞而發表的論文的質量和研究發現的正確性。為此,很多細胞庫現在都要對提交來的細胞系進行STR分型檢測,并對細胞系之間的交叉污染進行監測。
 
  細胞STR分型檢測方法
 
  基于毛細管電泳檢測的STR分型檢測使用的是多重PCR復合擴增系統,可以同時擴增19個STR位點加1個性別決定位點Amelogenin,每個被分析的人源細胞系都有其獨特的DNA重復模式,因此通過與基礎圖譜進行比對,即可對每一批新細胞系的種類進行確認。
 
  參考文獻
 
  1.Drexler,H.G.,Dirks,W.G.andMacLeod,R.A.F.(1999)Leukemia13,1601–7.
 
  2.Drexler,H.G.etal.(2001)Blood98,3495–6.
 
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  6.Buehring,G.C.,Eby,E.A.andEby,M.J.(2004)InVitroCell.Dev.Biol.40,211–5.
 
  7.Liscovitch,M.andRavid,D.(2007)CancerLett.245,350–2.
 
  8.FDA.GeneralRequirementsforLaboratoryControls.21CFR
 
  211.160and21CFR610.18.
 
  9.ATCCConnectionNewsletter(2007)27,2–4.
 
  10.ATCCConnectionNewsletter(2000)21,1–2.
 
  11.Masters,J.R.etal.(2001)Proc.Natl.Acad.Sci.USA98,8012–7.
 
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